Innehåll
Högpresterande vätskekromatografi (HPLC) är ett verktyg som används för att separera ämnen från en blandning. Separationen och identifieringen av vissa kemikalier sker främst i systemets kromatografiska kolonn. Många kolumntyper är tillgängliga för CLAE, och var och en används för en specifik typ av analys. C18-kolonnen är den starkaste icke-polära som vanligtvis används. Efter kontinuerlig användning under en längre tid minskar lösningsmedlets flödeshastighet genom det och analystiden ökar. En annan orsak till minskad analystid är att ha prover som lämnar små mängder kemikalier i kolonnmaterialet, vilket minskar möjligheten att separera dem. Återställningen av dess yta kan göras genom att behandla materialet med en serie specifika lösningsmedel för att rengöra det från kvarvarande prover och återuppliva stödmaterialet.
Steg 1
Ta bort kolumn C18 från flödesriktningen och placera den i motsatt riktning. Att få lösningsmedlet tillbaka igenom det kommer att lindra den ackumuleringseffekt som uppstår över tiden. Var noga med att inte lämna för mycket material i kolumnens slut. Vissa fabriker använder ett större nät överst så att nätet är i läget nedan när flödet ändrar riktning. Denna metod för restaurering kallas flödesomvandling. För att förhindra att uppbyggnad flyter till systemdetektorn och eventuellt orsakar ett hinder, låt den fungera utan att detektorn är ansluten och rikta flödet från kolonnen till bortskaffande.
Steg 2
Placera lösningsmedelspassageringsröret i en serie lösningsmedel för att eluera alla föreningar som kvarhålls i kolonnen i motsatt riktning. Dessa lösningsmedel varierar i sina hydrofila egenskaper. Genom att variera dem eluerar du föreningar av lika varierande hydrofil natur. Använd 50 ml av vart och ett av följande lösningsmedel, successivt: vatten (om du använder en buffert), metanol, isopropanol, diklormetan, hexan, diklormetan och isopropanol.
Steg 3
Byt ut kolonnen i rätt riktning och få ditt lösningsmedel att flöda genom den. Använd minst 75 ml för att tvätta den innan du fortsätter. Testa det med ett mönster som du använde när det var nytt och kontrollera resultaten. Var uppmärksam när du når de maximala retentionspunkterna och den totala analystiden. I vilken grad dessa attribut matchar det första testet när det fortfarande var nytt kommer det att indikera i vilken grad kolumnen återställdes. Om resultaten inte är tillfredsställande ersätter du kolumnen med en ny och slänger den gamla.
