Innehåll
Kall alkohol används för att separera DNA från vattenbaserade lösningar, så att den kan renas för efterföljande genetisk testning. Att tillsätta alkohol till en lösning som innehåller DNA är ett enkelt sätt att göra det rent vid lägre temperaturer och sakta ner de enzymer som försämrar det, vilket ger bättre utvinningsresultat.
Bryta cellmuren
Utvinningsförfarandena för att erhålla rent DNA måste avlägsna alla molekylära och kemiska komponenter i vävnaden från vilken DNA extraheras. De första stegen innebär förstörelse av cellväggar. Detta kan göras med olika kemiska medel som är kaustiska mot cellemembran men skadar inte DNA. Cellerna kan också sonikeras, homogeniseras eller malas för att förstöra membranen.
Ta bort lipider
När cellväggarna förstörs, tillsätts ett tvättmedel för att bli av med fetter och oljor som utgör cellmembranen. Rengöringsmedel orsakar upplösning av oljor och fetter i lösning.
Ta bort proteiner
Proteiner och enzymer kan digereras genom tillsats av ett proteas till lösningen. Proteaser bryter ner proteiner i små peptider och aminosyror.
Nedfällande DNA
Tillsatsen av iskall alkohol till en lösning kommer att fälla ut och aggregera DNA: n. Det genetiska materialet kan uppsamlas genom centrifugering av provet och dekantering av det flytande skiktet. Det borde existera som ett litet sediment i botten av centrifugröret.
Rening av DNA
DNA: n kan tvättas genom återuppslamning i en kall alkohollösning och centrifugeras flera gånger för erhållande av ett mycket rent prov. Typiska alkoholer som används innefattar etanol och isopropanol. Denna process lämnar ett mycket rent prov i strikt test.
